регистрировали их ферментацию. В результате применения оптимальных
полисубстратных сред производится выделение и накопление чистой культуры
микробов с одновременным определением их биохимических признаков.
Перспективным следует рассматривать развитие энзимоиндикационных
методов, в которых субстрат с индикатором отделен от питательной среды и
фиксирован на специальном носителе. В нашей стране разработаны углеводно-
бумажные диски с защитной пленкой (бумажные реагенты для определения
дезаминаз у микробов) и их аналоги БИС (бумажно-индикаторные системы),
углеводно-бумажные поплавки, углеводно-полимерные пленки . Все эти
препараты являются весьма перспективными, они позволяют в течение
кратчайшего срока (3—5 ч), используя общепринятые питательные среды и
лабораторную посуду, определять ферментативную активность различных видов
микроорганизмов.
Автономный препарат — карандаш-фермент, не имеющий аналогов ни у нас,
ни за рубежом, позволяет без применения питательных сред непосредственно на
предметном стекле определять биохимические свойства микробов.
Полисубстратная тест-система и энзимоиндикаторная лента используются
для одновременной идентификации 20 биохимических признаков у микробов. Это
новые виды простых «долгоживущих» препаратов, предназначенных для быстрого
и экономичного определения биохимических свойств микробов.
Электрофизический метод определения ферментативной активности микробов
включает посев микробной культуры на жидкие питательные среды, содержащие
пептонную воду, различные углеводы, многоатомные спирты, аминокислоты с
последующим ферментативным расщеплением исследуемых веществ и образованием
различных ионизированных продуктов распада, обнаруживаемых специальной
электронной аппаратурой. Результаты энзимоиндикации регистрируются через
45—60 мин с момента посева материала. Метод позволяет обнаружить и
идентифицировать конечные продукты распада, то есть конечные мотаболиты с
определением их биохимической и химической природы. Безусловно,
электрофизический метод заслуживает пристального внимания и нуждается в
дальнейшем изучении и доработке.
2. Иммунологическое направление, связанное с быстрым определением как
отдельных специфических детерминант, так и с индикацией целых антигенных
групп и комплексов, характеризующих роды, виды и серовары бактерий. К
собственно иммунологическому направлению мы относим классические
иммунологические методы, основанные на использовании естественных
реагентов. Реакции преципитации в жидкости по Асколи и в геле по Оухтерлоню
и Манчини (особенно их микроварианты) сохраняют свое значение как методы
экспресс-индикации патогенных микробов и выявления их антигенов в различных
материалах.
Перспективными являются рапид-системы для одновременной и быстрой
индикации различных видов микроорганизмов в реакциях микроагглютинации,
хотя по-прежнему не решены вопросы создания оптимальных видов и наиболее
экономичных форм таких систем. Иммунологические принципы распознавания
антигенов являются весьма тонкими, специфическими, чувствительными, с
большими индикационно-диагностическими возможностями. Комплексирование
иммунологических принципов с физическими, химическими и некоторыми другими
принципами способствовало дифференциации иммунологического направления на
ряд самостоятельных направлений, которые приводятся ниже.
3. Иммунофизическое направление, использующее различные по природе,
форме и величине виды мелкодисперсных носителей (сорбентов) антигенов и
антител, способствующих повышению чувствительности комплексных
иммунологических методов.
Реакции пассивной гемагглютинации и их модификации связаны с
использованием эритроцитарных диагностических препаратов. Эритроцитарную
диагностику с успехом применяются для ускоренного обнаружения и
идентификации как патогенных, так и условно-патогенных микроорганизмов
(например, возбудителей туляремии, бруцеллеза, сальмонеллеза и др.) в
различных патологических материалах, получаемых от больных, и в объектах
внешней среды. Реакции с эритроцитарными диагностикумами являются весьма
чувствительными, и в этом отношении часто превосходят другие серологические
реакции. Они введены в официальные инструкции по экспресс-индикации
бактериальных агентов в элементах внешней среды и в материалах, полученных
от пораженных людей и животных.
Одновременно продолжаются поиски новых носителей антигенов и антител,
которые были бы безантигенными, стабильными, не разрушающимися при
длительном хранении, а применяемые реакции — простыми по технике постановки
(например, стекольные тесты) и исследования с их помощью — экономичными.
Совершенствуются реакции с применением цветных целлюлозных частиц в
качестве носителей антигенов и антител. Положительными свойствами такого
рода препаратов являются: 1) отсутствие собственной антигенности; 2)
стабильность при длительном хранении; 3) демонстративность и простота
техники постановки реакции, обычно на предметном стекле; 4) высокая
скорость прохождения реакции; 5) экономичность.
Кроме того, полезным и оправданным считаем поиск новых носителей
антигенов и антител. В этом отношении перспективными являются ионообменные
смолы, латексы, целлюлоза и ее производные и ряд других веществ, которые
могут способствовать повышению чувствительности серологических реакций.
4. Иммунохимическое направление, связанное с использованием
разнообразных комплексных соединений специфических антител или антигенов с
химическими веществами. Присоединенные химические вещества придают им новые
феноменологические способности и свойства, тем самым, расширяя возможности
экспресс-индикации микробных агентов в частности и лабораторного анализа
вообще.
Большую популярность и практическую значимость приобрели методы
быстрого иммунофлуоресцентного анализа (прямой, непрямой,
антикомплементарный), которые ныне официально используются как методы
экспрессной индикации и быстрого определения микроорганизмов.
Дальнейшее развитие весьма перспективного иммунохимического направления
во многом зависит от химиков, которые должны разработать достаточно яркие
новые красители, вступающие в соединения со специфическими антителами и
антигенами. В результате могут быть получены препараты с новыми
феноменологическими свойствами, позволяющими проводить экспресс-индикацию
микробных культур и отдельных клеток с помощью широко распространенных
микроскопических устройств (типа МБИ различных марок).
5. Иммуноферментное направление, интенсивно развивающееся в последние
годы. Разработаны прямой, непрямой, антикомплементарный и другие методы
быстрого обнаружения микробов путем использования иммуноэнзимологического
принципа; предложены новые виды ферментов, а также разнообразные виды
хромогенных субстратов. Данное направление является весьма перспективным,
развитие его может привести в ближайшие годы к появлению новых методов
экспресс-индикации микроорганизмов.
6. Иммуноэлектрофоретическое направление успешно развивается с конца 50-
х годов. Разработаны многочисленные методы иммуноэлектрофореза. Однако для
целей экспресс-индикации микробов чаще прибегают к встречному
иммуноэлектрофорезу. Применение новых химических красителей, ферментной или
радиоактивной метки позволит резко повысить чувствительность метода
иммуноэлектропреципитации.
7. Иммунорадиологическое направление связано с использованием
разнообразных конъюгатов специфических антител или антигенов, соединенных с
радиоактивными веществами, которые придают им новые феноменологические
свойства и способности, расширяя возможности экспресс-индикационного
метода. Весьма перспективно дальнейшее развитие иммунорадиологического
направления, так как оно несомненно приведет к созданию новых, простых
методов экспресс-индикации микроорганизмов.
8. Микроцитологическое направление быстрого цитоморфо-логического
анализа связано с использованием светлопольной, фазово-контрастной или
люминесцентной микроскопии бактериологических мазковых препаратов,
обработанных и окрашенных красителями, позволяющими быстро идентифицировать
микроорганизмы по их морфологии и специфическим структурным элементам
микробной клетки. Исследованию подвергают как нативный (гной, мокрота,
моча, СМЖ, различные экссудаты и др.), так и обогащенный (например,
центрифугированием, фильтрованием и другими методами) патологический
материал.
9. Бактериологическое направление связано с ускоренным выделением и
накоплением бактериальных популяций патогенных, условно-патогенных и
санитарно-показательных микроорганизмов. Оно основано на использовании
оптимальных ростовых питательных сред, содержащих необходимые
биостимуляторы, для ускоренного получения бактериальной культуры и
частичной их идентификации по совокупности культуральных признаков.
10. Фагодиагностическое направление, которое предусматривает, с одной
стороны, идентификацию микробов с помощью специфических индикаторных
бактериофагов, а с другой,— обнаружение и индикацию специфических фагов в
патологическом и другом материалах с помощью индикаторных микробных
культур.
Ускоренная фагодиагностика в ряде случаев является необходимым и
полезным методом, позволяющим значительно сократить сроки исследований и
установить природу возбудителя даже в тех случаях, когда другими методами,
в виду его изменчивости или загрязненности материала, он остается
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5