Было продемонстрировано, что этот метод даёт лучшие результаты -
относительно культивирования в бульоне и приготовления влажной камеры,
поскольку способен определять T.vaginalis в концентрациях менее 3
организмов в 1 мл. Однако культивирование в культуре - это не простой
рутинный метод; он дорог и неудобен для быстрой диагностики[5,9,
14,15,22,29,36,37]
1.4.3 Иммунологические методы
Ограничения культуральных и микроскопических методов для выявления
T.vaginalis заставили учёных развивать альтернативные методы, которые могут
определять антиген, антитело или нуклеиновые кислоты в уретральном или
вагинальном экссудате. Иммунологические методы не получили должного
распространения из-за отсутствия качественных отечественных тест-систем.
Кроме этого, все методы серологической диагностики T.vaginalis мало
информативны, т. к данный антиген не вызывает 100%-го иммунного ответа.
Хотя для подтверждения диагноза ими можно воспользоваться. Используются
различные методы определения антител: агглютинация, непрямая
гемаглютинация, диффузия в геле, флюоресценция антител и иммуноферментный
анализ, метод иммуноблотинга. Определённое диагностичическое значение имеет
прямое определение специфических белков T.vaginalis в биопробах с
использованием моноклональных антител в качестве быстрого метода
диагностики трихомоноза. Прямой иммуноферментный и иммунофлюоресцентный
анализ мазков вагинального соскоба (тест-система фирмы California
Integrated Diagnostics, Benicia, Calif.), использующий перокидазо - и
флюорохром - меченые смеси моноклональных антител к различным структурам
T.vaginalis был таким же чувствительным и специфичным, как и используемый
культуральный метод. К тому же результаты определения возбудителя
трихомоноза получают в течение одного часа, что позволяет произвести
экспресс-скрининг [10,17,35,41,42].
1.4.4 Методы генной диагностики T.vaginalis
С начала 90-х годов в лабораторную клиническую практику стали,
внедрятся технологии определения видоспецифических нуклеотидных
последовательностей областей ДНК (мишеней) бактерий и клеток высших
организмов. Сначала это была ДНК-гибридизационная технология. В тест-
системе Affirm VP используются синтетические зонды для выявления как
Gardnerella vaginalis, так и T.vaginalis из одного вагинального соскоба.
Данная методика лучше, чем метод влажной камеры. Тем не менее, встречались
ложноотрицательные результаты при её сравнении с культуральным методом (80%
чувствительности относительно положительных образцов в культуре). Одна из
гибридизационных методик - “дот-блот” гибридизация, в которой использовался
фрагмент 2,3 ДНК T.vaginalis в качестве зонда, могла определить ДНК
T.vaginalis в вагинальном секрете. Однако нестабильность зонда, выполнение
специфических технических приёмов, особенно использование радиоактивной
метки, являлись большими недостатками этой методики. После того как
радиоактивно меченный зонд заменили на флюоресцентно-меченный ДНК-зонд, эта
методика сразу нашла своё применение при выявлении бессимптомного
носительства T. vaginalis. Новая генодиагностическая технология - ПЦР, в
последнее время опережает остальные методы генодиагностики трихомоноза и
наравне с культуральным методом широко используется в клинической практике.
Риу в 1999 г. предложили ПЦР методику идентификации ДНК влагалищной
трихомонады с праймерами для амплификации повторяющегося фрагмента TV-E650.
Сравнив свой метод с другими используемыми методиками диагностики:
микроскопией нативного мазка, культуральным, а также с клиническими
данными. Он считает, что предложенный метод ПЦР на 100% чувствителен и
специфичен, т.к. не давал перекрёстной реакции с другими простейшими и
Candida albicans. Использованная им методика ПЦР в два раза чаще выявляла
трихомонаду, чем другие лабораторные методики. Японские учённые так же
сумели подтвердить правомерность постановки диагноза “трихомониаз” в 19-ти
случаях у женщин и в одном случае у мужчины методом ПЦР[43,44,45,46,48].
5. Лечение трихомоноза
Препарат выбора - метронидазол, или его аналог. Препарат назначают
внутрь, внутривенно или внутривагинально. Эффективность химиотерапии
достигает 80-95%. В последнее время чаще рекомендуется применять
комплексную терапию, с использованием новейших препаратов, к примеру,
таких, как Наксоджин. Кроме этого советуют проводить местную
обработку слабыми дезинфекторами и растворами, снимающими воспаление.
Причина данной терапии обусловлена адаптационными механизмами
трихомонад. В силу чего сегодня редкий врач владеет методикой
эффективного лечения этой патологии [1,2,18,25].
2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Все исследования по теме квалификационной работы проводились на базе
Одесского областного кожно-венерологического диспансера, расположенного по
адресу: г. Одесса, ул. Воробьева, 5.
В исследовании, которое проходило в период с декабря 2003 года по май
2004 года, принимали участие исключительно мужчины в количестве 150
человек. Пациенты были обследованы на трихомоноз тремя методами:
культуральным, микроскопии окрашенного мазка и ПЦР.
Всем обследуемым, за сутки до взятия материала производилась
внутримышечная инъекция пирогенала, в дозе – 50 МПД, согласно инструкции
приведенной [18]. Вследствие чего на момент анализа у 60% больных
отмечались слизистые, слизисто – гнойные выделения.
2.1. Исследование культуральным методом.
Культуральный метод исследования заключался в посевах патологического
материала (отделяемого уретры) на ИПС, по методике [21]. Использовалась
питательная среда для выделения влагалищных трихомонад (Э).
Следующего состава, г/л:
ферментолизат биомассы микроорганизмов без оболочек
(осветлённый)
14,2
мальтоза
8,0
хлорид натрия
6,0
хлорид калия
0,1
карбонат натрия
1,2
РН среды доводился до 6,0 ± 0,2.
Препарат разработан ЦКВИ, выпускается НПО “ Питательные среды“.
Материал выделений и соскоб забираются ложечкой Фолькмана, если
выделения обильные, то можно использовать бактериологическую петлю, при
этом для увеличения отделяемого, левой рукой производится массаж уретры
выжимающими приёмами (дистально-проксимальное направление). При посеве
ложечка Фолькмана с посевным материалом опускается в среду до дна пробирки
и энергично круговыми движениями смывается. Пробирка у спиртовки
закрывается ватно-марлевой пробкой и ставится на инкубацию при 37 градусах
Цельсия.
Учёт результатов проводился путём микроскопического исследования
препаратов через 7 дней после посева. Осадок отбирался пастеровской
пипеткой и микроскопировался в тёмном поле с увеличением 280. При
положительном результате наблюдались движущиеся паразиты: одиночные или в
скоплениях. Все препараты смотрелись нативными.
2.2. Исследование методом микроскопии мазка.
Метод микроскопии мазка основан на анализе соскоба или выделений, с
последующей их окраской, методика[39]. Соскоб берется желобоватым зондом
или тупой ложечкой из уретры. Из ложечки биологический материал извлекался
копьём для перфорации кожного покрова. Выделения брались мазком –
отпечатком.
Стекла обрабатывались так же, как и посуда, бывшая в употреблении,
мылись и кипятились 15 минут в 0,5% мыльном растворе, затем многократно
ополаскивались в горячей воде и не менее 5 раз в дистиллированной. После
этого сушились в сухожаровом шкафу. Далее натирались между двумя дощечками
с прикреплённой тканью и помещались до опыта в смесь спирта с эфиром 1:1.
(Чистота стёкол в подобной диагностике имеет важное значение!)
Отобранный материал эмульгировался (очень нежно) на предметном стекле,
после чего высушивался на воздухе 20-30 минут, затем окрашивался – 1%
раствором метиленового синего, в течении 3 минут. В положительных случаях,
обнаруживались трихомонады различной формы. Не больше одной в поле зрения.
Ядро окрашивалось в темно – синий, а протоплазма – в бледно-синий
цвет. Трихомонады имели: овальную, круглую и грушевидную формы. Препарат
смотрелся при увеличении 630 с иммерсионным объективом.
2.3 Исследование методом ПЦР
Для ПЦР – диагностики использовались соскобы уретры.
Все анализы на основе этого метода по группам больных проводились
сотрудниками кафедры Кожных и венерических болезней Одесского
Государственного Медицинского Университета.
Результаты обследованных были любезно предоставлены
{XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX}! Простите этого человека не указываю!
3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В ходе проведения собственных исследований по сравнению различных
методов диагностики трихомоноза у мужчин, общее количество которых
составляло 150 человек, были получены следующие результаты: наиболее
удачным методом диагностики трихомоноза является метод микроскопии
окрашенного мазка. Его информативность составила 71%. За ним следует метод
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6